El agar yema de huevo modificado se basa en la fórmula original del agar yema de huevo desarrollada por McClung y Toabe para el aislamiento y diferenciación de organismos basados en la producción de lecitinasa y lipasa y actividad proteolítica.
Table of Contents
Composición del agar de yema de huevo
Ingredientes | Gms / litro |
Hidrolizado enzimático de caseína | 15.000 |
Digerido papaico de harina de soja | 5.000 |
Extracto de levadura | 5.000 |
Cloruro de sodio | 5.000 |
L-cistina | 0.400 |
Hemin | 0,005 |
Vitamina K1 | 0,010 |
Así que eso | 20.000 |
PH final (a 25 ° C): 7,5 ± 0,2
Principio del agar de yema de huevo
- El hidrolizado enzimático de caseína y el digerido papaico de la harina de soja proporcionan los nutrientes esenciales junto con sustancias carbonosas y nitrogenadas.
- El extracto de levadura aporta nutrientes del complejo B.
- El cloruro de sodio mantiene el equilibrio osmótico.
- La L-cistina es un aminoácido que también actúa como agente reductor.
- La vitamina K1 y la hemina ayudan a mejorar el crecimiento de organismos anaeróbicos.
- Los microorganismos que poseen la enzima lecitinasa descomponen la lecitina en diglicéridos insolubles y fosforilcolina, lo que da como resultado una zona blanca opaca de precipitación que se extiende más allá del borde de la colonia.
- Los microorganismos que poseen la enzima lipasa hidrolizan las grasas libres presentes en el medio para formar glicerol y ácidos grasos libres.
- En consecuencia, la liberación de ácidos grasos libres insolubles da como resultado la formación de un brillo iridiscente (aceite sobre agua) que se puede ver cuando la placa se mantiene en ángulo con respecto a una fuente de luz.
- En comparación con la lecitinasa, la lipasa no se difunde y produce una reacción solo en la superficie del agar en las inmediaciones de la colonia.
- La proteólisis se nota por el desarrollo de zonas claras en el medio que rodea el crecimiento de la colonia.
Preparación y método de uso del agar de yema de huevo
- Suspenda 50,41 gramos en 900 ml de agua destilada.
- Caliente a ebullición para disolver el medio por completo.
- Esterilice en autoclave a una presión de 15 libras (121 ° C) durante 15 minutos.
- Enfriar a 50-55 ° C y agregar asépticamente 100 ml de emulsión de yema de huevo (o agregar 10 ml de emulsión de yema de huevo estéril por 90 ml de medio).
- Mezclar bien y verter en placas de Petri estériles.
- Antes de la inoculación, deje que el medio se equilibre a temperatura ambiente.
- Si el medio aún no está prerreducido, debe reducirse colocándolo en condiciones anaeróbicas durante 18-24 horas.
- Inocular agar yema de huevo, modificado con un cultivo puro de 24 a 72 horas. Rayar el medio para obtener colonias aisladas.
- Inmediatamente después de la inoculación, colocar el medio, en posición invertida (con el agar hacia arriba), en una atmósfera anaeróbica e incubar a 35-37ºC. durante 48-72 horas.
- Observe las placas para detectar la aparición de producción de lecitinasa y lipasa y actividad proteolítica después de 48 horas de incubación. Los cultivos no deben descartarse como negativos hasta después de 7 días de incubación.
Interpretación de los resultados del agar de yema de huevo
Organismos | Crecimiento |
Clostridium perfringens | Crecimiento; lecitinasa positivo; zona blanca opaca que se extiende desde el borde de las colonias, lipasa negativa; sin brillo |
Clostridium sporogenes | Crecimiento; lecitinasa negativo; lipasa positiva; un brillo iridiscente en la superficie del agar cuando la placa se sostiene en ángulo con respecto a la fuente de luz |
Bacteroides fragilis | Crecimiento; lecitinasa y lipasa negativas; sin reacción en agar |
Fusobacterium necrophorum | Buen crecimiento exuberante; reacción negativa para lecitinasa; positivo para la reacción de la lipasa brillo iridiscente en la superficie y el medio de la colonia; sin actividad proteolítica sin zona clara alrededor de las colonias |
Usos del agar de yema de huevo
- Es un medio enriquecido, no selectivo y diferencial recomendado para su uso en la detección de la producción de lecitinasa y lipasa y la actividad proteolítica de ciertos anaerobios obligados.
- Se utiliza para la identificación presuntiva de varios Clostridium , Fusobacterium y Prevotella.
- También se utiliza en la prueba de Nagler para la identificación presuntiva de Clostridium perfringens .
Limitaciones del agar de yema de huevo
- Se recomienda que se realicen pruebas bioquímicas, inmunológicas, moleculares o de espectrometría de masas en colonias de cultivo puro para una identificación completa.
- El medio no proporciona información completa para la identificación de cepas bacterianas. Se deben realizar pruebas bioquímicas y / o serológicas adicionales en colonias de cultivo puro para una identificación completa.
- Una prueba de lecitinasa negativa debe compararse con una placa de control sin inocular, ya que la lecitinasa puede difundirse por toda la placa de agar y dificultar la interpretación.
- Algunos microorganismos pueden requerir hasta una semana para producir una reacción de lipasa positiva.
- Se debe inocular simultáneamente un caldo de enriquecimiento con la muestra de ensayo para detectar el pequeño número de organismos anaerobios.
Dr. Martin Passen, a dedicated nutrition educator with a master’s in nutrition education and nearing completion of a clinical nutrition and dietetics master’s. Passionate about sharing valuable information effectively.