El agar citrato de Simmons es un medio selectivo y diferencial que prueba la capacidad de un organismo para utilizar el citrato como única fuente de carbono y los iones de amonio como única fuente de nitrógeno. Se utiliza para diferenciar bacterias gramnegativas sobre la base de la utilización de citrato. Es útil para seleccionar organismos que utilizan citrato como su principal fuente de carbono y energía. Inicialmente, el medio de citrato fue desarrollado por Koser que contenía sal de amonio como la única fuente de nitrógeno y citrato como la única fuente de carbono para diferenciar Escherichia coli y Enterobacter aerogenes mediante pruebas IMViC. Posteriormente, Simmons modificó la formulación de Koser agregando agar y azul de bromo timol.
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Composición del agar citrato de Simmons
Ingredientes | Gms / litro |
Sulfato de magnesio | 0,200 |
Dihidrogenofosfato de amonio | 1.000 |
Fosfato dipotásico | 1.000 |
Citrato de sodio | 2.000 |
Cloruro de sodio | 5.000 |
Azul de bromotimol | 0,080 |
Así que eso | 15.000 |
PH final (a 25 ° C) 6,8 ± 0,2
Principio del agar citrato de Simmons
El agar citrato de Simmons se utiliza para probar la capacidad de un organismo para utilizar el citrato como fuente de energía. El dihidrogenofosfato de amonio y el citrato de sodio sirven como la única fuente de nitrógeno y carbono, respectivamente. El fosfato dipotásico actúa como tampón . El cloruro de sodio mantiene el equilibrio osmótico del medio. El sulfato de magnesio es un cofactor de una variedad de reacciones metabólicas. El azul de bromotimol es el indicador de pH. El agar bacteriológico es el agente solidificante.
Los organismos capaces de utilizar dihidrogenofosfato y citrato de amonio crecerán sin restricciones en este medio. Si se puede usar citrato, el microbio acumulará subproductos alcalinos / básicos. Las bacterias que pueden crecer en este medio producen una enzima, citrato-permeasa , capaz de convertir el citrato en piruvato . El piruvato puede entonces entrar en el ciclo metabólico del organismo para la producción de energía . El crecimiento es indicativo de la utilización de citrato, un metabolito intermedio en el ciclo de Krebs.. La utilización de citrato depende de la presencia de una enzima citrasa producida por el organismo, que descompone el citrato en ácido oxaloacético y ácido acético. Estos productos se convierten posteriormente en ácido pirúvico y dióxido de carbono. El dióxido de carbono generado se combina con sodio y agua para formar carbonato de sodio, un producto alcalino. La alcalinidad del medio se indica mediante un cambio de color del indicador de pH. El cambio de pH convierte el indicador azul de bromotimol en el medio de verde a azul por encima de un pH de 7,6 y esto constituye una prueba positiva.
Preparación de agar citrato de Simmons
- Suspenda 24,28 gramos en 1000 ml de agua destilada.
- Calentar a ebullición para disolver el medio por completo.
- Mezclar bien y distribuir en tubos o matraces. Para tubos, dispense 4.0 a 5.0 ml en tubos de 16 mm.
- Esterilice en autoclave a una presión de 15 libras (121 ° C) durante 15 minutos.
- Fresco en posición inclinada (largo inclinado, trasero poco profundo).
- Los tubos deben almacenarse en un refrigerador para garantizar una vida útil de 6 a 8 semanas.
- El medio sin inocular será de un verde bosque intenso debido al pH de la muestra y al azul de bromotimol.
Interpretación de los resultados del agar citrato de Simmons
Resultado | Observación | Organismos |
Prueba positiva |
| Serratia y la mayoría de los Enterobacter, Citrobacter, Klebsiella, Proteus y Providencia especies |
Prueba negativa |
| Escherichia coli, Shigella, Yersinia, especies de Edwardsiella , |
Usos del agar citrato de Simmons
- Se utiliza para la diferenciación entre Enterobacteriaceae y los miembros del grupo aerogenes sobre la base de la utilización de citrato como única fuente de carbono.
- El agar citrato de Simmons se puede utilizar para diferenciar Salmonella enteritidis con citrato positivo y miembros de Salmonella subgénero II, III y IV de Salmonella typhi, Salmonella paratyphi A, Salmonella pullorum y Salmonella gallinarum negativos a citrato .
Limitaciones del agar citrato de Simmons
- Antes de usar agua, asegúrese de que el pH del agua sea de 6.5 a 7.0. El color inicial del medio puede desviarse del color esperado, si se ignora la precaución anterior.
- El pH afecta el rendimiento del medio y debe controlarse correctamente.
- El medio debe estar recién preparado porque en condiciones secas, pueden aparecer cambios de color incluso antes de la inoculación, especialmente en la parte inferior de la inclinación.
- Algunos organismos son capaces de crecer en citrato y no producen cambio de color. El crecimiento se considera una prueba de utilización de citrato positiva, incluso en ausencia de un cambio de color.
- El inóculo debe ser de un cultivo puro durante la noche desarrollado en un medio sólido y no de una suspensión de caldo.
- Se recomienda que se realicen pruebas bioquímicas, inmunológicas, moleculares o de espectrometría de masas en colonias de cultivo puro para una identificación completa.
- Si no se incuban los tubos con las tapas sueltas, se pueden producir resultados falsos negativos.
- Use un inóculo ligero para rayar la inclinación; un inóculo abundante puede dar lugar a resultados falsos positivos.
- Al inocular varios productos bioquímicos del mismo cultivo, inocule este medio primero o inocular con una aguja antes de sembrar este medio. El arrastre de glucosa u otros nutrientes a este medio puede producir resultados falsos positivos.
Dr. Martin Passen, a dedicated nutrition educator with a master’s in nutrition education and nearing completion of a clinical nutrition and dietetics master’s. Passionate about sharing valuable information effectively.