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Composición del agar selectivo de Yersinia
Ingredientes | Gms / litro |
Peptona, especial | 20.000 |
Extracto de levadura | 2.000 |
Manitol | 20.000 |
Piruvato de sodio | 2.000 |
Cloruro de sodio | 1.000 |
Sulfato de magnesio | 0,010 |
Desoxicolato de sodio | 0.500 |
Rojo neutro | 0,030 |
Cristal violeta | 0,001 |
Así que eso | 12.500 |
PH final (a 25 ° C): 7,4 ± 0,2
Nota: El agar selectivo de Yersinia se usa con cefsulodina y novobiocina para el aislamiento de Yersinia enterocolitica en un entorno de laboratorio.
Principio del agar selectivo de Yersinia
- El medio diferencia entre bacterias fermentadoras y no fermentadoras de manitol.
- Los microorganismos que fermentan el azúcar manitol acidifican el medio y provocan una caída localizada del pH alrededor de las colonias.
- En presencia de rojo neutro, las colonias toman color rojo. Debido a la disminución localizada del pH, también puede estar presente una zona de bilis precipitada.
- Los organismos negativos al manitol forman colonias incoloras y translúcidas.
- El medio es selectivo debido a la presencia de desoxicolato de sodio y violeta cristal, que inhiben bacterias grampositivas y gramnegativas.
- La adición de un suplemento antibiótico lo hace altamente selectivo para Yersinia.
- Las colonias típicas de Y. enterocolitica formarán colonias de color rojo oscuro que se asemejan al ojo de buey, que normalmente están rodeadas por un borde transparente.
- El tamaño de la colonia, la suavidad y la proporción del diámetro del borde al centro pueden variar entre los diferentes serotipos.
- El cloruro de sodio mantiene el equilibrio osmótico del medio. El piruvato de sodio y el sulfato de magnesio estimulan el crecimiento del organismo. El agar es el agente solidificante.
Preparación y método de uso del agar selectivo para Yersinia
- Suspenda 29,02 gramos en 500 ml de agua destilada.
- Caliente a ebullición para disolver el medio por completo.
- Esterilice en autoclave a una presión de 15 libras (121 ° C) durante 15 minutos.
- Enfriar a 45-50 ° C y agregar asépticamente el contenido reconstituido de 1 vial de suplemento selectivo de Yersinia o agregar asépticamente 10 ml de una solución acuosa esterilizada que contiene 4 mg de cefsulodina y 2,5 mg de novobiocina.
- Mezclar bien antes de verter en placas de Petri estériles.
- Separe la muestra lo antes posible después de recibirla en el laboratorio. La placa de rayas se utiliza principalmente para aislar cultivos puros de muestras que contienen flora mixta.
- Alternativamente, si el material se está cultivando directamente de un hisopo, pase el hisopo sobre un área pequeña de la superficie en el borde; luego salga de esta área inoculada.
- Incubar a 22-32 ° C durante 24-48 horas o suspender la muestra (alimentos, heces, etc.) en solución salina tamponada con fosfato estéril e incubar hasta 21 días (4) a 4 ° C.
- Subcultivar periódicamente las muestras en una placa de agar Yersinia e incubar como se indicó anteriormente.
Interpretación de los resultados del agar selectivo para Yersinia
Las colonias de Yersinia enterocolitica aparecen translúcidas o translúcidas con centros de color rosa oscuro. Los bordes de la colonia son enteros o irregulares. Después de 48 horas de incubación, las colonias aparecen de color rosa oscuro con un borde translúcido y pueden estar rodeadas por una zona de bilis precipitada. El crecimiento de organismos distintos de Yersinia está marcado a inhibido por completo.
Organismos | Crecimiento |
Yersinia enterocolitica | Translúcido con centro rosa oscuro y precipitado biliar (colonias en ojo de buey) |
Yersinia pseudotuberculosis | Crecimiento con centro rosa oscuro y precipitado biliar. No hay zona transparente alrededor de las colonias. |
Usos del agar selectivo de Yersinia
- Se recomienda para el aislamiento selectivo y el recuento de Yersinia enterocolitica a partir de muestras clínicas y de alimentos.
- El agar selectivo de Yersinia también se puede utilizar para el aislamiento de especies de Yersinia distintas de Y. enterocolitica , por ejemplo, para Y. pseudotuberculosis.
Limitaciones del agar selectivo para Yersinia
- Serratia liquefaciens , Citrobacter freundi y Enterobacter agglomerans pueden parecerse a Y. enterocolitica, que puede identificarse mejor mediante pruebas bioquímicas.
- Un medio menos selectivo, como MacConkey Agar, también debe inocularse con la muestra (e incubarse a 35 +/- 2 ° C) para la detección de otros patógenos involucrados en la infección.
- En ocasiones, puede ser necesario un procedimiento de “enriquecimiento en frío” para el aislamiento de Yersinia enterocolitica , a partir de muestras de heces y otros materiales, como alimentos.
- La confirmación bioquímica y serológica es necesaria para la identificación completa de cepas sospechosas.
- El agar selectivo de Yersinia no está diseñado para su uso en el diagnóstico de una enfermedad u otras condiciones en humanos.
- Debido a la variación nutricional, se pueden encontrar algunas cepas que crezcan mal o no crezcan en este medio. Son necesarias más pruebas para la confirmación de Yersinia spp.
- El crecimiento de Yersinia frederiksenii, Y. kristensenii, Y. pseudotuberculosis e Y. intermedia no se inhibe en medio completo. Las colonias de estos organismos deben diferenciarse de Y. enterocolitica sobre la base de características adicionales.
Dr. Martin Passen, a dedicated nutrition educator with a master’s in nutrition education and nearing completion of a clinical nutrition and dietetics master’s. Passionate about sharing valuable information effectively.