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Definición de la prueba de ureasa
La prueba de ureasa es una prueba bioquímica que detecta la fermentación alcalina de la orina (urea) con la producción resultante de amoníaco por microorganismos.
- La fermentación de la urea se produce en presencia de la enzima “ureasa”, lo que da como resultado dos moléculas de amoníaco y dióxido de carbono.
- La actividad ureasa es una de las características importantes para la identificación de especies de Proteus y permite que Proteus se distinga de los miembros de Enterobacteriaceae que no fermentan lactosa.
- Christensen desarrolló la prueba en 1946 para la diferenciación de bacilos entéricos. La base de agar urea utilizada para la prueba de la actividad de la ureasa se denomina Christensen Urea Agar en su honor.
- Durante la prueba, los organismos utilizan urea como única fuente de nitrógeno, produciendo una cantidad suficiente de amoníaco para superar la capacidad amortiguadora del medio.
- El cambio de color del medio como resultado del cambio de pH es indicativo del resultado de la prueba.
Objetivos de la prueba de ureasa
- Probar la capacidad de un organismo para producir la enzima ureasa que hidroliza la urea.
- Diferenciar Proteus positivo para ureasa de otras Enterobacteriaceae.
Microorganismos probados
La prueba de urea es parte de la batería de pruebas para identificar lo siguiente:
- Los patógenos entéricos gramnegativos, incluida Yersinia spp.
- Bacilos gramnegativos exigentes: Brucella, Helicobacter pylori y Pasteurella.
- Bacilos grampositivos: Corynebacterium y Rhodococcus spp.
- Levaduras: Cryptococcus spp.
Directamente, esta prueba se realiza como una prueba rápida en muestras de biopsia gástrica para detectar la presencia de H. pylori.
Principio de la prueba de ureasa
El medio de urea, ya sea en caldo o agar, contiene urea y el rojo de fenol como indicador de pH. Muchos organismos, especialmente los que causan infecciones del tracto urinario, producen la enzima ureasa, que cataliza la división de la urea en presencia de agua para liberar dos moléculas de amoníaco y dióxido de carbono. El amoníaco se combina con el dióxido de carbono y el agua para formar carbonato de amonio, que hace que el medio sea alcalino, cambiando el indicador de su color amarillo anaranjado original a un rosa brillante. Esta prueba se realiza como parte de la identificación de varios géneros y especies de la familia Enterobacteriaceae , incluidas Klebsiella, Proteus y algunas especies de Citrobacter y Yersinia , así como algunasEspecies de Corynebacterium . La prueba también es útil para identificar Cryptococcus , Brucella , Helicobacter pylori y muchas otras bacterias que producen la enzima ureasa. Hay discos disponibles que combinan urea y fenilalanina desaminasa (PDA), lo que permite una prueba de un disco para identificar Proteus , Providencia y Morganella y separarlos de Klebsiella y Yersinia enterocolitica . Las reacciones del disco son rápidas y sensibles y permiten la detección rápida de agentes de infecciones graves, por ejemplo, Brucella y Cryptococcus .
Medios, reactivos y suministros utilizados
Medios utilizados
- Para la detección de la producción de ureasa se pueden utilizar tanto medios de agar urea inclinados como caldos. El medio de agar incluye la base de agar urea (agar Christensen) y el caldo incluye el caldo de urea.
- Además, también se encuentran disponibles kits de prueba rápida para la detección de la actividad de la ureasa.
- La composición de la base de agar urea se da a continuación:
SN | Ingredientes | Gramo / litro |
1. | Dextrosa | 1.0 |
2. | Digerido péptico de tejido animal | 1,5 |
3. | Cloruro de sodio | 5,0 |
4. | Fosfato monopotásico | 2.0 |
5. | Fenol rojo | 0,012 |
6. | Así que eso | 15.0 |
PH final a 25 ° C: 6,8 ± 0,2 |
Suministros utilizados
- Palos o lazos de madera esterilizados
- Solución salina o agua en un pequeño tubo de plástico para la prueba del disco
- Incubadora a 35 ° C y 30 ° C
Procedimiento de prueba de ureasa
A. Preparación de medios
- Aproximadamente 24,52 gramos del medio deshidratado se disuelven en 950 ml de agua destilada en un vaso de precipitados.
- La solución se calienta para llevarla a ebullición con el fin de disolver el medio por completo.
- La suspensión preparada se esteriliza en autoclave a una presión de 15 libras, 121 ° C durante 15 minutos.
- El vaso de precipitados se saca después del autoclave y se enfría a 50 ° C. Se añaden al vaso de precipitados 50 ml de solución estéril de urea al 40% y se mezclan bien.
- El medio se distribuye en tubos y se coloca en una posición para obtener inclinaciones de agar.
B. Actividad de ureasa
- Se toma un asa de una colonia bien aislada con un asa de inoculación y se inocula en las inclinaciones de agar. La inoculación debe realizarse solo en la inclinación y no debe apuñalarse el trasero.
- A continuación, los tubos se incuban con las tapas flojas a una temperatura de 35 a 37 ° C. Para los no fermentadores, los tubos se incuban a 30 ° C.
- Se observa el desarrollo de color rosa en los tubos durante un período de hasta 7 días.
- Si no se observa crecimiento en la inclinación, se debe realizar una inoculación adicional con inóculo pesado.
C. Prueba rápida de ureasa
- La prueba rápida de ureasa también se denomina prueba CLO ( organismo similar a Campylobacter ) y se utiliza para la identificación rápida de Helicobacter pylori .
- Para la prueba rápida de ureasa, se toma una biopsia de la capa mucosa del antro del estómago y se coloca sobre el caldo de urea con indicador de rojo fenol.
- A continuación, se observa el cambio de color del tubo de amarillo a rosa.
Interpretación de los resultados de la prueba de ureasa
- Una prueba positiva se demuestra por un color magenta intenso a rosa brillante en 15 minutos a 24 horas.
- Una prueba negativa no muestra cambios de color.
Organismos de control
- Prueba positiva: Proteus mirabilis.
- Prueba negativa: Escherichia coli.
Usos de la prueba de ureasa
- La prueba de ureasa se usa para identificar organismos que son capaces de hidrolizar la urea para producir amoníaco y dióxido de carbono.
- La prueba se utiliza particularmente para la identificación presuntiva de especies de Proteus para otros miembros de la familia Enterobacteriaceae.
- La prueba también diferencia a Proteus de las bacterias que no fermentan la lactosa.
- Esta prueba se realiza como una prueba rápida en muestras de biopsia gástrica para detectar la presencia de H. pylori.
Limitaciones de la prueba de ureasa
- Algunos organismos deberían tener un resultado rápido, ya que dividen rápidamente la urea ( Brucella y H. pylori ), mientras que otros pueden reaccionar lentamente.
- Cuando se realizan pruebas durante la noche en un medio que contiene peptona, la reacción alcalina puede deberse no a la ureasa sino a la hidrólisis de la peptona.
- La urea es sensible a la luz y puede sufrir autohidrólisis. Por tanto, el medio debe almacenarse entre 2 y 8 ° C en la oscuridad.
- La prueba es menos sensible si el medio no está tamponado.
Dr. Martin Passen, a dedicated nutrition educator with a master’s in nutrition education and nearing completion of a clinical nutrition and dietetics master’s. Passionate about sharing valuable information effectively.