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Definición de prueba de indol
La prueba de indol es una prueba bioquímica realizada en especies bacterianas para detectar su capacidad para producir indol a partir de triptófano en presencia de un grupo de enzimas llamadas “triptofanasa”.
- Es una prueba cualitativa que prueba la conversión de triptófano en indol.
- La prueba se realiza como parte de la prueba IMViC que se utiliza para diferenciar a los miembros de la familia Enterobacteriaceae.
- Es importante en la identificación de diferentes bacterias como Escherichia coli, Proteus, Morganella , etc.
- Desempeña un papel central en la caracterización de coliformes, lo que está indicado por las diversas variaciones de la prueba del indol y en combinación con otras pruebas bioquímicas.
- Todavía se utiliza como método tradicional para distinguir E. coli indol positivo de Enterobacter y Klebsiella indol negativo .
- Se utiliza una variación de la prueba, llamada reactivo de Ehrlich (que usa alcohol etílico en lugar de alcohol isoamílico) cuando la prueba debe realizarse en no fermentadores y anaerobios.
Objetivos de la prueba de indol
- Detectar la formación de indol a partir del triptófano por la acción enzimática del triptófano.
- Diferenciar miembros de la familia Enterobacteriaceae, especialmente E. coli de Enterobacter y Klebsiella.
Microorganismos probados
- Crecimiento reciente de una varilla Gram-negativa en un medio que no contiene colorantes y contiene triptófano, por ejemplo, BAP o CHOC.
- Bacilos anaeróbicos grampositivos.
- Bacilos anaeróbicos gramnegativos.
Principio de la prueba de indol
La capacidad de un organismo para dividir el indol del aminoácido triptófano se debe a la presencia de triptófano. El triptófano es un aminoácido que sufre desaminación e hidrólisis en presencia de la enzima triptofanasa. La desaminación reductora del triptófano da como resultado la producción de indol a través de la molécula intermedia ácido indol pirúvico. Durante el proceso de desaminación, la triptofanasa cataliza la eliminación del grupo amino (-NH 2 ) de la molécula de triptófano. La enzima requiere fosfato de piridoxal como coenzima. Los productos finales de la reacción de catálisis son indol, ácido pirúvico, amonio (NH 4 +) y energía. El indol, si está presente, se combina con el aldehído en el reactivo para producir un compuesto quinoidal de color rosa a rojo violeta (reactivo de benzaldehído) o un color azul a verde (reactivo de cinamaldehído). El indol se combina con la solución de reactivo de Kovac (ácido clorhídrico y p-dimetilaminobenzaldehído en alcohol amílico) para formar una coloración amarilla o rojo cereza. El alcohol amílico es insoluble en agua y, por lo tanto, forma una capa aceitosa de color rojo en la parte superior del caldo. En la prueba rápida de manchas, el indol se detecta directamente de una colonia que crece en un medio rico en triptófano. El indol se combina con el p-dimetilaminocinamaldehído (DMACA) presente en el papel de filtro a un pH ácido para producir un compuesto de azul a azul verdoso.
Medios, reactivos y suministros utilizados
Reactivos usados
- Para la prueba de manchas, se prepara p -dimetilaminobenzaldehído al 5% o p- dimetilaminocinamaldehído al 1% en HCl concentrado al 10% (v / v).
- Para el método del tubo, el reactivo de Kovac se usa para organismos aeróbicos, y el reactivo de Ehrlich se usa para anaerobios y productores débiles de indol.
Reactivo de Kovac
Ingredientes | Concentración |
p-dimetilaminobenzaldehidro | 50 gramos |
Ácido clorhídrico | 250 ml |
Alcohol amílico | 750 ml |
- El medio utilizado con este reactivo es caldo que contiene triptófano, agar motilidad-indol-ornitina o agar sulfuro-indol-motilidad (SIM).
Reactivo de Ehrlich
Ingredientes | Concentración |
p-dimetilaminobenzaldehidro | 1 gramo |
Ácido clorhídrico | 20 ml |
Alcohol etílico | 95 ml |
- El medio utilizado con el reactivo de Ehrlich es una infusión cardíaca o un medio anaeróbico con triptófano.
Suministros utilizados
- Asa, hisopo o varilla estériles para inoculación
- Papel de filtro (opcional)
Procedimiento de prueba de indol
A. Prueba rápida puntual
- Se toma un trozo de papel de filtro y se humedece con el reactivo.
- Se toma una colonia bien aislada de un cultivo de 18-24 horas con un asa de inoculación y se frota sobre el papel de filtro húmedo.
- Luego se observa el papel para ver la apariencia del color.
B. Prueba de tubo
- El medio de caldo o el medio de agar en el tubo se apuñala con la colonia extraída de un cultivo de 18-24 horas.
- Para el medio líquido, se toma una pequeña porción del caldo inoculado en un tubo separado.
- A continuación, los tubos se incuban a 37 ° C durante 24 horas.
- Para el reactivo de Kovac, se agregan tres gotas del reactivo de Kovac por el costado del tubo y se observa el cambio de color en el menisco.
- Para el reactivo de Ehrlich, se añaden 0,5 ml de xileno al tubo y se invierte para mezclar bien. Además, se agregan seis gotas de reactivo indol de Ehrlich por el costado del tubo y se observa el color debajo de la capa de xileno.
Interpretación de resultados de la prueba de indol
A. Prueba puntual
- El desarrollo de color azul en 20 segundos indica la presencia de indol.
- Un resultado negativo está indicado por la ausencia de color o la aparición de un color ligeramente rosado en el papel de filtro.
B. Prueba de tubo
- La formación de una coloración rosa-roja (anillo rojo cereza) en el reactivo en el punto de contacto entre el reactivo y el medio indica un resultado positivo.
- La ausencia de color o la aparición de un color ligeramente amarillo indica un resultado negativo.
Usos de la prueba de indol
- La prueba de indol se utiliza para evaluar la capacidad de un organismo para utilizar triptófano y producir indol.
- La prueba se utiliza para diferenciar miembros de la familia Enterobacteriaceae como parte de la prueba IMViC.
- La prueba también diferencia a Proteus mirabilis de otras especies de Proteus .
- Esta prueba diferencia E. coli indol-positiva de Enterobacter y Klebsiella indol-negativa .
- La prueba de diferencia más K . pneumoniae (indol negativo) de K. oxytoca (indol positivo) y Citrobacter freundii (indol negativo) de Citrobacter koseri (indol positivo).
Limitaciones de la prueba de indol
- El indol detectable se difundirá a las colonias dentro de los 5 mm de una colonia de 2 a 3 mm, dando resultados falsos positivos.
- No se deben usar medios que contengan tintes (por ejemplo, EMB , MAC).
- El medio de cultivo debe contener una cantidad adecuada de triptófano. No utilice agar Mueller-Hinton para la prueba, porque el triptófano se destruye durante la hidrólisis ácida de la caseína.
- Solo el reactivo de cinamaldehído se puede utilizar para pruebas puntuales de microorganismos anaeróbicos. Es un reactivo más sensible, pero menos estable.
- No utilice una placa con un disco de nitrato para realizar la prueba de indol, ya que el nitrato puede interferir con la prueba de indol localizado al inducir resultados falsos negativos.
- Si la prueba rápida de indol es negativa, el aislado podría ser positivo en la prueba de tubo más sensible. La extracción con xileno es la prueba más sensible. Los sustitutos del xileno son menos sensibles.
- Para los bacilos gramnegativos exigentes, como C. hominis, es necesario un inóculo pesado y una extracción.
Dr. Martin Passen, a dedicated nutrition educator with a master’s in nutrition education and nearing completion of a clinical nutrition and dietetics master’s. Passionate about sharing valuable information effectively.