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Principio de la prueba de susceptibilidad a la novobiocina
La novobiocina es un antibiótico que interfiere con el desempaquetado y reenvasado del ADN durante la replicación del ADN y el ciclo celular bacteriano. La novobiocina se une a la ADN girasa y bloquea la actividad de la adenosina trifosfatasa (ATPasa). La identificación de laboratorio de S. saprophyticus se realiza sobre la base de la ausencia de hemólisis , coagulasa y resistencia a la novobiocina . Staphylococcus saprophyticus , estafilococos grampositivos coagulasa negativos, es una bacteria uropatógena que causa infecciones urinarias agudas no complicadas, particularmente en pacientes jóvenes de mediana edad. A diferencia de la mayoría de los otros CONS, S. saprophyticus rara vez es resistente a la mayoría de los antibióticos activos contra los microorganismos grampositivos. S. saprophyticus es innatamente resistente al antibiótico novobiocina. Por lo tanto, la detección de estafilococos coagulasa negativos en cultivos de orina para detectar resistencia a la novobiocina es una identificación presuntiva confiable de S. saprophyticus.La susceptibilidad a la novobiocina se determina colocando un disco de papel impregnado de novobiocina en una placa de agar sembrada con el organismo en investigación. A medida que el organismo se multiplica durante la incubación para producir un césped de crecimiento confluente, las células se exponen al antibiótico que se difunde en el agar desde el disco de papel. Si las bacterias son susceptibles a la novobiocina, se formará una zona visible de inhibición alrededor del disco, que representa un área donde la concentración de antibiótico ha impedido el crecimiento bacteriano. Ninguna zona de inhibición alrededor del disco representa que el organismo sea resistente al antibiótico.
Procedimiento de prueba de susceptibilidad a la novobiocina
- Usando un cultivo puro de 18-24 horas, prepare una suspensión del organismo; equivalente a un estándar de opacidad de McFarland 0.5; para ser identificado en caldo de tríptico de soja, agua estéril o caldo de infusión de cerebro y corazón (BHI).
- Con un hisopo estéril, prepare un césped de crecimiento sobre toda la placa frotando sobre toda la placa en 3 direcciones y alrededor del borde de la placa.
- Aplique asépticamente un disco de novobiocina de 5 ug sobre la superficie del agar inoculado y presione ligeramente hacia abajo para asegurar un contacto completo con el medio.
- Incubar la placa en condiciones aeróbicas durante 18 a 24 horas entre 35 y 37 ° C.
- Mida la zona de inhibición alrededor del disco de novobiocina y regístrelo como susceptible o resistente.
Interpretación de los resultados de la prueba de susceptibilidad a la novobiocina
Sensible: zona de inhibición mayor de 16 mm
Resistente: zona de inhibición menor o igual a 16 mm
Limitaciones
- El disco de novobiocina no es útil y puede dar resultados engañosos si se realiza en aislamientos distintos a los de muestras de orina.
- Otros Staphylococcus coagulasa negativos ocasionales aislados de humanos que no son Staphylococcus saprophyticus como Staphylococcus cohnii , Staphylococcus pulvereri o Staphylococcus xylosus también pueden ser resistentes a la novobiocina.
Control de calidad
- Control positivo (resistente) – Staphylococcus saprophyticus (ATCC 15305)
- Control negativo (sensible) – Staphylococcus epidermidis (ATCC 12228)
Dr. Martin Passen, a dedicated nutrition educator with a master’s in nutrition education and nearing completion of a clinical nutrition and dietetics master’s. Passionate about sharing valuable information effectively.