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Definición de la prueba de Millon
La prueba de Millon es una prueba analítica utilizada para la detección del aminoácido tirosina, que es el único aminoácido que contiene el grupo fenol. La prueba de Millon es una prueba específica para tirosina, pero no es una prueba específica para proteínas, ya que también detecta el grupo fenólico presente en otros compuestos. Por lo tanto, mientras se realiza la prueba de Millon, es esencial que también se realicen otras pruebas como la prueba de Biuret y la prueba de Ninhidrina . Como muchas proteínas se componen de tirosina, la prueba es útil para la detección de dichas proteínas. La prueba fue descubierta y nombrada en honor al químico francés Auguste Nicolas Eugene Millon.
Objetivos de la prueba de Millon
- Detectar la presencia de proteínas que contienen tirosina en una muestra determinada.
- Detectar la presencia de compuestos fenólicos.
- Diferenciar la tirosina de otros aminoácidos.
Principio de la prueba de Millon
La prueba de Millon se basa en el principio de nitrificación del grupo fenol en la tirosina, que luego forma complejos con metales pesados como el mercurio. El reactivo utilizado para la prueba se llama reactivo de Millon y consiste en nitrato de mercurio y nitrato de mercurio que se disuelve en ácido nítrico concentrado. En la prueba, el grupo fenol de la molécula de tirosina es nitrado por el ácido nítrico presente en el reactivo. La tirosina nitrada luego se combina con los iones de mercurio en la solución para formar un precipitado o solución de color rojo. En algunas proteínas que contienen tirosina, la reacción inicial entre el nitrato de mercurio da como resultado un precipitado de color blanco o amarillo. Sin embargo, después de la adición de ácido nítrico y el calentamiento, el residuo se vuelve de color rojo.
Requisitos
Reactivo
- Reactivo de Millon : El reactivo de Millon consiste en nitrato de mercurio y nitrato de mercurio disueltos en ácido nítrico y agua destilada.
Preparación del reactivo de Millon: disolver 160 gramos de nitrato de mercurio y 160 gramos de nitrato de mercurio en 400 ml de solución concentrada de ácido nítrico. A continuación, el reactivo se lleva a 1000 ml mediante la adición de 600 ml de agua destilada. La fórmula se puede ajustar para adaptarse a los parámetros de rendimiento.
- Muestra (1% de tirosina)
Materiales necesarios
- Tubos de ensayo
- Soporte para tubos de ensayo
- Pipetas
- Baño de agua
Procedimiento de la prueba de Millon
- Aproximadamente 2 ml de la solución de muestra o la solución de tirosina al 1% se toman en un tubo de ensayo.
- A esto, se agregan aproximadamente 2 ml de reactivo de Millon. A continuación, los tubos de ensayo se mantienen en el baño de agua durante unos 2 minutos si no se observa inmediatamente un precipitado de color rojo.
- A continuación, se observa la formación del precipitado coloreado en los tubos.
Resultado e interpretación de la prueba de Millon
- Resultado positivo: un resultado positivo en la prueba de Millon se demuestra por la formación de un precipitado de color rojo o rosa. Esto indica la presencia de tirosina o proteína que contiene tirosina.
- Resultado negativo: un resultado negativo en la prueba de Millon se demuestra por la ausencia de precipitado coloreado en el tubo de ensayo. Esto indica la ausencia de tirosina o proteína que contiene tirosina.
Usos de la prueba de Millon
- La prueba de Millon se utiliza para la detección de proteínas que contienen tirosina en una muestra determinada.
- La prueba también ayuda a diferenciar la tirosina de otros aminoácidos.
- La prueba es útil en la detección de la proteína caseína y la proteína que se encuentra en la carne cruda.
Limitaciones
- Los compuestos como el ácido salicílico y los compuestos fenólicos dan un resultado positivo a esta prueba; por lo tanto, debe evitarse cualquier otro compuesto fenólico que pueda estar presente en el tubo de ensayo. Se deben realizar pruebas como la prueba de Biuret y la prueba de ninhidrina para confirmar.
- La presencia de cloro en la solución puede interferir con la reacción; por lo tanto, la prueba no se puede realizar en una muestra que contenga cloruros.
- La formación de un precipitado blanco o amarillo podría observarse inmediatamente después de la adición del reactivo de Millon debido a la desnaturalización de las proteínas por los iones mercúricos.
Dr. Martin Passen, a dedicated nutrition educator with a master’s in nutrition education and nearing completion of a clinical nutrition and dietetics master’s. Passionate about sharing valuable information effectively.