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Objetivos de la prueba de hidrólisis de lípidos
- Determinar la capacidad del organismo para hidrolizar lípidos.
- Identificar bacterias capaces de producir la exoenzima lipasa.
Principio de la prueba de hidrólisis de lípidos
Los lípidos generalmente son moléculas apolares que no se disuelven bien en agua. Las grasas son un tipo de lípidos que son grandes polímeros de ácidos grasos y glicerol que son demasiado grandes para entrar en la membrana celular. Para utilizar las grasas, las células bacterianas secretan exoenzimas conocidas como lipasas fuera de la célula que hidrolizan el lípido en ácidos grasos y glicerol. Estas bacterias capaces de producir exoenzima lipasa se denominan bacterias lipolíticas. Los lípidos forman una emulsión, cuando se dispensan en agar, produciendo opacidad mientras que sus productos finales hidrolizados, glicerol y ácidos grasos no forman tal emulsión con agar, por lo que no producen tal opacidad; más bien producen transparencia.
En la prueba de hidrólisis de lípidos, las bacterias de prueba se cultivan en placas de agar que contienen tributirina como sustrato lipídico. El aceite de tributirina forma una suspensión opaca en el medio de agar. Si la bacteria tiene la capacidad de hidrolizar lípidos, las colonias bacterianas hidrolizan la tributirina en el medio en las áreas que las rodean a glicerol soluble y ácidos grasos (ácido butírico), mientras que el resto de las áreas de las placas contienen tributirina sin hidrolizar. El resultado de la hidrólisis se demuestra como zonas claras transparentes alrededor de las colonias y el resto de las áreas de las placas permanecen opacas, lo que indica una región de tributirina sin hidrolizar.
Medios utilizados en la prueba de hidrólisis de lípidos
Agar tributirina: digestión péptica de tejido animal 5,0 g / l, extracto de levadura 3,0 g / l, agar 15,0 g / l, pH final (a 25 ° C) 7,5 ± 0,2
Procedimiento de prueba de hidrólisis de lípidos
- Inocular el medio de agar tributirina con rayas de una sola línea del organismo
- Incubar anaeróbicamente en un frasco de gas inmediatamente después del rayado y transferir a la incubadora mantenida a 35-37 o C durante 24-48 horas para anaerobios y para aerobios incubar la placa a 35-37 o C durante 24-48 horas.
- Observe la zona despejada alrededor del crecimiento bacteriano.
Interpretación de los resultados de la prueba de hidrólisis de lípidos
- Prueba positiva: zona clara alrededor del crecimiento bacteriano.
- Prueba negativa: ausencia de zona clara alrededor del crecimiento bacteriano.
Dr. Martin Passen, a dedicated nutrition educator with a master’s in nutrition education and nearing completion of a clinical nutrition and dietetics master’s. Passionate about sharing valuable information effectively.