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Objetivos de la prueba de hidrólisis del almidón
- Determinar la capacidad del organismo de hidrolizar el almidón.
- Diferenciar organismos en función de su capacidad para hidrolizar el almidón con la enzima α-amilasa.
- Ayuda en la diferenciación de especies de los géneros Corynebacterium, Clostridium, Bacillus, Bacteroides, Fusobacterium y miembros de Enterococcus .
Principio de la prueba de hidrólisis del almidón
El almidón es un carbohidrato complejo (polisacárido), compuesto por dos constituyentes: amilosa, un polímero de cadena lineal de 200-300 unidades de glucosa, y amilopectina, un polímero ramificado más grande. Las moléculas de α-D-glucosa en amilosa y amilopectina están unidas por enlaces 1,4-α-glicosídicos (acetal). Las dos formas difieren en que la amilopectina contiene cadenas laterales de polisacáridos conectadas a aproximadamente una de cada 30 glucosa en la cadena principal. Estas cadenas laterales son idénticas a la cadena principal, excepto que el carbono número 1 de la primera glucosa en la cadena lateral está unido al carbono número 6 de la glucosa de la cadena principal. El enlace es, por tanto, un enlace 1,6-α-glicosídico. El almidón es demasiado grande para atravesar la membrana celular bacteriana. Por lo tanto, para que tenga valor metabólico para las bacterias, primero debe dividirse en fragmentos más pequeños o en moléculas de glucosa individuales. Los organismos que producen y secretan las enzimas extracelulares α-amilasa y oligo-1,6-glucosidasa son capaces de hidrolizar el almidón rompiendo los enlaces glicosídicos entre las subunidades de azúcar en maltosa, un disacárido y algunos monosacáridos como la glucosa. Estos disacáridos y monosacáridos entran en el citoplasma de la célula bacteriana a través de una membrana semipermeable y, por lo tanto, son utilizados por las endoenzimas.
La producción de amilasa es conocida en algunas bacterias y bien conocida en el caso de los hongos. La capacidad de degradar el almidón se utiliza como criterio para la determinación de la producción de amilasa por parte de un microbio. En el entorno de laboratorio, se prueba realizando una prueba de hidrólisis de almidón o una prueba de almidón para determinar la presencia o ausencia de una enzima amilasa. La prueba utiliza yodo como indicador. El almidón en presencia de yodo produce una coloración azul oscura del medio ya que el yodo queda atrapado en la estructura helicoidal del almidón y una zona amarilla o zona clara alrededor de una colonia en un medio azul indica actividad amilolítica. La zona clara indica la hidrólisis del almidón en monosacáridos que no pueden unirse a la molécula de yodo y aparecen como la zona clara alrededor del crecimiento bacteriano.
El procedimiento de la prueba de hidrólisis de almidón.
- Utilizando una técnica estéril, haga una inoculación de una sola racha de un organismo a analizar en el centro de la placa etiquetada.
- Incubar las placas inoculadas con bacterias durante 48 horas a 37 ° C.
- Después de la incubación, inunde la superficie de las placas con una solución de yodo con un gotero durante 30 segundos.
- Elimina el exceso de yodo.
- Examine la zona clara alrededor de la línea de crecimiento bacteriano.
Interpretación de los resultados de la prueba de hidrólisis de almidón
Prueba positiva: una zona clara alrededor de la línea de crecimiento después de la adición de solución de yodo.
Prueba negativa: coloración azul oscuro del medio
Control de calidad de la prueba de hidrólisis de almidón
Escherichia coli ATCC25922- Reacción negativa, sin aclaramiento.
Bacillus subtilis ATCC6633- Reacción positiva limpiando la colonia.
Referencias
- Tille PM 2014. Microbiología de diagnóstico de Bailey y Scott. Trece ediciones. Mosby, Inc., una filial de Elsevier Inc. 3251 Riverport Lane. San Louis. Misuri 63043
- Sigmon J. 2008. La prueba de hidrólisis del almidón. http://www.asmscience.org/content/education/imagegallery/image.3172
- Aneja KR 2003. Experimentos en microbiología, fitopatología y biotecnología, cuarta edición revisada, New Age International (P) limited, Ansari road, Daryaganj, Nueva Delhi-110002.
Prueba de hidrólisis de almidón: objetivos, principio, procedimiento y resultados
Dr. Martin Passen, a dedicated nutrition educator with a master’s in nutrition education and nearing completion of a clinical nutrition and dietetics master’s. Passionate about sharing valuable information effectively.