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Definición de la prueba de Bial
La prueba de Bial es una prueba química que se realiza para detectar la presencia de pentosas y pentosanos (derivados de las pentosas). Se realiza una derivación de esta prueba denominada Orchintest de Bial para detectar la presencia de ARN en las soluciones.
Objetivos de la prueba de Bial
- Detectar la presencia de carbohidratos .
- Distinguir las pentosas y pentosanos de otros derivados de carbohidratos como las hexosas.
Principio de la prueba de Bial
Esta prueba se basa en el principio de que, bajo hidrólisis, los pentosanos se hidrolizan en pentosas. Además, las pentosas se deshidratan para producir furfural, que a su vez se condensa con orcinol para formar un precipitado azul verdoso. En presencia de hexosas, se forma hidroxifurfural en lugar de furfural que tras la condensación con orcinol forma un precipitado de color marrón turbio. La intensidad de la precipitación es directamente proporcional a la concentración de pentosas en la muestra. La intensidad del color desarrollado depende de la concentración de HCl, cloruro férrico, orcinol y la duración de la ebullición. La concentración de azúcares se determina midiendo la absorbancia de una longitud de onda de 620 nm en un espectrofotómetro o en un colorímetro de filtro rojo.
Reacción
Requisitos
A. Materiales necesarios
Equipo:
- Espectrofotómetro ultravioleta
- Mezclador Vortex
- Calentador de manto / Baño de agua.
Productos químicos / reactivos:
- Reactivo de Bial
- Azúcar ribosa
- Otros carbohidratos si lo desea
- Muestra
Artículos de vidrio y otros equipos:
- Tubos de ensayo, soporte para tubos de ensayo, pipetas, vaso de precipitados, tapones para tubos de ensayo de hielo, papel tisú, botella de lavado.
B. Reactivos
- Reactivo de Bial: se disuelven 300 mg de orcinol en 5 ml de etanol. Agregue 3,5 ml de esta mezcla a 100 ml de una solución al 0,1% de FeCL3.6H2O. El reactivo así formado debe almacenarse en una botella oscura y usarse dentro de un par de horas.
- Solución madre de ribosa : 200 µg de ribosa por ml de agua destilada Se preparará una solución madre de ribosa a partir de la solución almacenada. Nota: Si se desea, se pueden utilizar como muestras otros carbohidratos de la misma concentración. Si se utiliza ARN, se añaden 300 µg / ml de solución madre de ARN al tampón Tris-EDTA.
Procedimiento de la prueba de Bial
- Pipetee diferentes volúmenes (50 µl, 100 µl, etc.) de solución de ribosa de la solución madre suministrada (200 µg / ml) en una serie de tubos de ensayo y complete el volumen a 1 ml con agua destilada.
- Tome un tubo etiquetado como uno como blanco que contenga 1 ml de agua destilada y el resto de los tubos etiquetados del 2 al 9 para la construcción de una curva estándar. Los tubos 10-15 son para las muestras desconocidas.
- Añada 5 ml de reactivo bial a cada tubo y mezcle bien con vórtex.
- Enfríe los tubos.
- Cubra los tubos con tapas en la parte superior e incube a 90 ° C durante 17 minutos o al baño de agua hirviendo durante 10 minutos.
- Enfriar los tubos a temperatura ambiente y medir la densidad óptica de las soluciones a 620 nm contra un blanco.
- Prepare una curva estándar de absorbancia frente a la concentración de ribosa.
- Determine la cantidad de ribosa en la muestra desconocida trazando una curva estándar de A620 en el eje Y y la concentración de Ribosa en el eje X.
Resultado e interpretación de la prueba de Bial
- La presencia de un complejo azul-verde indica la presencia de pentosas en la muestra.
- Usando el gráfico, se puede determinar la concentración de azúcar ribosa en la muestra. También se puede hacer una interpretación similar para la detección de ARN.
Usos de la prueba de Bial
- Esta prueba se utiliza para detectar la presencia de pentosas y pentosanos en diferentes muestras.
- Esta prueba también se puede utilizar para la cuantificación de ARN en una muestra.
Limitaciones de la prueba de Bial
- Con un calentamiento prolongado, los glucoronatos también pueden producir un precipitado de color azul verdoso que puede dar lugar a resultados falsos positivos.
- El color producido puede ser diferente con diferentes azúcares y la concentración puede no ser proporcional a la intensidad en niveles más altos.
Dr. Martin Passen, a dedicated nutrition educator with a master’s in nutrition education and nearing completion of a clinical nutrition and dietetics master’s. Passionate about sharing valuable information effectively.