- Cuando se inocula un medio líquido fresco con un número determinado de bacterias y se incuba durante un período de tiempo suficiente, se obtiene un patrón de crecimiento característico de las bacterias.
- Si la población bacteriana se mide periódicamente y el logaritmo del número de bacterias viables se representa en un gráfico en función del tiempo, se obtiene una curva de crecimiento característica que se conoce como curva de crecimiento.
- La medición de la tasa de crecimiento de las bacterias es una técnica microbiológica fundamental y tiene un uso generalizado en la investigación básica, así como en aplicaciones agrícolas e industriales.
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Principio de la curva de crecimiento bacteriano
Cuando se inoculan bacterias en un medio líquido y se cuenta la población celular a intervalos, es posible trazar una curva de crecimiento bacteriano típica que muestre el crecimiento de las células a lo largo del tiempo. Muestra cuatro fases distintas de crecimiento.
- Fase de retraso: crecimiento lento o falta de crecimiento debido a la adaptación fisiológica de las células a las condiciones de cultivo o dilución de exoenzimas debido a densidades celulares bajas iniciales.
- Fase logarítmica o exponencial: Tasas de crecimiento óptimas, durante las cuales el número de células se duplica en intervalos de tiempo discretos conocidos como tiempo medio de generación.
- Fase estacionaria: el crecimiento (división celular) y la muerte de las células se contrarrestan entre sí, lo que no da como resultado un aumento neto en el número de células. La tasa de crecimiento reducida generalmente se debe a la falta de nutrientes y / o la acumulación de constituyentes tóxicos de desecho.
- Fase de declive o muerte: la tasa de muerte supera la tasa de crecimiento, lo que resulta en una pérdida neta de células viables.
La determinación turbidimétrica es útil para trazar curvas de crecimiento de bacterias en caldo o medio líquido. Es uno de los métodos más simples que se utilizan para analizar las tendencias de crecimiento porque utiliza un espectrofotómetro para rastrear los cambios en la densidad óptica (DO) a lo largo del tiempo. En otras palabras, a medida que aumenta el número de células en una muestra, la transmisión de luz a través de la muestra disminuirá.
Materiales necesarios para la curva de crecimiento bacteriano
Cultivo bacteriano (E. coli), caldo (caldo Luria Bertani (LB), caldo nutritivo)
Artículos de vidrio: Matraces cónicos, Probeta graduada, Tubos de ensayo estériles, Petriplates estériles
Reactivos: agua destilada
Otros requisitos: incubadora, agitador, espectrofotómetro, micropipetas, puntas, asas estériles
Procedimiento de curva de crecimiento bacteriano
Día 1:
- Usando un asa estéril, esparza un asa de cultivo bacteriano en la placa de agar.
- Incubar a 37 o C durante 18-24 horas.
Dia 2:
- Recoger una sola colonia de cada cepa de la placa de agar e inocularla en un tubo de ensayo que contenga 10 ml de caldo esterilizado en autoclave.
- Incubar el tubo de ensayo durante la noche a 37 o C.
Día 3:
- Tomar 250 ml de caldo esterilizado en autoclave en un matraz cónico estéril de 500 ml.
- Inocular 5 ml del cultivo crecido durante la noche en el matraz anterior.
- Tomar OD a la hora cero. Incubar el matraz a 37 o C.
- Alícuota de 1 ml de la suspensión de cultivo en un intervalo de cada 30 minutos y tome la densidad óptica (DO) a una longitud de onda de 600 nm usando un espectrofotómetro, hasta que la lectura se vuelva estática.
Alternativamente, se pueden agregar 50-100 µl de formaldehído a todas las alícuotas de 1 ml de suspensión de cultivo tomadas cada 30 minutos. La densidad óptica de todas las alícuotas se puede tomar al final del experimento.
- Al final del experimento, trace un gráfico de tiempo en minutos en el eje X frente a la densidad óptica a 600 nm en el eje Y para obtener una curva de crecimiento de bacterias.
Resultado esperado de la curva de crecimiento bacteriano
Se obtiene una curva de crecimiento logarítmica que muestra los cambios en el tamaño de una población bacteriana a lo largo del tiempo en el cultivo. La curva de crecimiento es hiperbólica debido al patrón de crecimiento bacteriano exponencial.
Dr. Martin Passen, a dedicated nutrition educator with a master’s in nutrition education and nearing completion of a clinical nutrition and dietetics master’s. Passionate about sharing valuable information effectively.